荧光定量PCR：精确定量检测DNA或RNA模板的技术解析
荧光定量PCR，一般缩写成qPCR（PCR）或者实时荧光定量PCR（Real-time PCR），它属于一种技术，这种技术是这样操作的，即在PCR反应进程里，借助荧光信号，去对DNA或者RNA模板展开精确的定量检测，该技术可不只是能够判定目标基因“现不现”，而且还能确切知晓“有多少” 。
一、 核心概念：与常规PCR的根本区别
二、 工作原理
qPCR的定量基础所在是荧光化学物质，随着PCR产物进行积累，荧光信号跟着增强，仪器当中的光学系统会实时去读取每个循环结束之际的荧光值。
主要的荧光检测化学方法：
采用DNA结合染料的方法（属于非特异性检测范畴），其中具有代表性的染料是SYBR Green I 。其原理是，此种染料能够以特异性的方式嵌入到双链DNA的小沟里面，进而发出强烈的荧光 。要是不存在双链DNA ，那么荧光就会极其微弱 。所以 ，像是在PCR反应里 ，每合成出一条双链DNA ，荧光信号便会增强一些 。它的优点是 ，具备成本低的特性 ，使用起来较为便利 ，而且对于任何PCR产物都能够适用 。然而其也存有缺点 ，也就是特异性比较差 。它除了能够与反应当中所有符合要求的双链DNA结合以外 ，还能与引物二聚体以及非特异性扩增产物结合 ，这样一来就有可能致使定量出现不准确的情况 。所以，往后一般都得开展熔解曲线分析，以此去验证扩增产物的特异性。
在用于特异性检测的水解探针法中间，存在着这样一个代表探针，被称作探针，其有着自身的原理要点，除了一对引物之外。于反应体系当中，还去加入一条有着特异性的寡核苷酸探针，这条探针的5‘端标记着一个报告荧光基团，3’端标记着一个淬灭荧光基团，当探针处于完整状态之下的时候，因为荧光共振能量可以发生转移，报告基团所具有的荧光会被淬灭基团吸收，在PCR延伸阶段的时候，Taq酶所具备的水解酶活性会把探针进行水解，使得报告基团与淬灭基团彼此分离，进而可以发出荧光，它所具备的优点是特异性极高。由于荧光信号单单源自特异性探针的水解过程，并不会受到非特异性产物以及引物二聚体的干扰，缺点在于探针的合成成本相对较高，其设计存在的难度超出了 Sybr Green 法的难度。
三、 主要应用领域
qPCR技术，具备高灵敏度，拥有高特异性，有着宽动态范围，基于这些特性，所以它，已然成为分子生物学以及医学研究里，不可缺少的工具，被广泛应用 。
四、 注意事项
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